Poboljšana senzitivnost i reproducibilnost PCR metode za detekciju Listeria spp. i L. monocytogenes u mleku
Improved sensitivity and reproducibility of the PCR method for detection of Listeria spp. and L. monocytogenes in milk
2011
Autori
Lakićević, BrankicaStjepanović, Aleksandra
Tolinački, Maja
Golić, Nataša
Topisirović, Ljubiša
Članak u časopisu (Objavljena verzija)
Metapodaci
Prikaz svih podataka o dokumentuApstrakt
Listeria monocytogenes, prouzrokovač listerioze kod ljudi i životinja, je fakultativan intraćelijski mikroorganizam široko rasprostranjen u prirodi. U cilju izolacije i detekcije L. monocytogenes iz hrane koriste se tradicionalne mikrobiološke i nove molekularno-genetičke metode. Cilj ovog rada je bio povećanje osetljivosti i ponovljivosti PCR metode u detekciji L. monocytogenes u mleku. U tu svrhu, uzorci pasterizovanog mleka su kontaminirani serijskim razblaženjima sojeva L. monocytogenes 4b ATCC 119115 i Listeria innocua ATCC 33090. Dobijeni rezultati na veštački kontaminiranim uzorcima pasterizovanog mleka, ukazuju da osetljivost PCR metode zavisi od perioda inkubacije i izbora prajmera. Najbolji rezultati su dobijeni nakon 24 h inkubacije, pomoću prajmera za hlyA gen, kada je bilo moguće detektovati 1 ćeliju L. monocytogenes tj. 1 CFU/ml.
Listeria monocytogenes is a facultative intracellular Grampositive bacterium, ubiquitous in nature and capable of causing listeriosis in humans and animals. Conventional microbiological techniques and modern molecular approaches are currently used for the isolation and detection of L. monocytogenes in food samples. The aim of this study was to improve the sensitivity and reproducibility of PCR for the detection of Listeria spp. in milk. For that purpose milk samples were artificially inoculated with serial dilutions of L. monocytogenes 4b ATCC 19115 and L. innocua ATCC 33090. The results obtained on artificially contaminated milk samples indicated that incubation time and target genes have an influence on the sensitivity of PCR detection. The best results were obtained after 24 h of preenrichment, with primers complementary to the hlyA gene, when it was possible to detect 1 CFU/mL of Listeria spp.
Ključne reči:
PCR / milk / Listeria spp. / L. monocytogenes / detectionIzvor:
Acta Veterinaria-Beograd, 2011, 61, 2-3, 239-245Izdavač:
- Univerzitet u Beogradu - Fakultet veterinarske medicine, Beograd
Finansiranje / projekti:
- Izučavanje gena i molekularnih mehanizama u osnovi probiotičke aktivnosti bakterija mlečne kiseline izolovanih sa područja zapadnog Balkana (RS-MESTD-Basic Research (BR or ON)-173019)
DOI: 10.2298/AVB1103239L
ISSN: 0567-8315
WoS: 000291964500013
Scopus: 2-s2.0-79960029903
Institucija/grupa
Institut za molekularnu genetiku i genetičko inženjerstvoTY - JOUR AU - Lakićević, Brankica AU - Stjepanović, Aleksandra AU - Tolinački, Maja AU - Golić, Nataša AU - Topisirović, Ljubiša PY - 2011 UR - https://imagine.imgge.bg.ac.rs/handle/123456789/544 AB - Listeria monocytogenes, prouzrokovač listerioze kod ljudi i životinja, je fakultativan intraćelijski mikroorganizam široko rasprostranjen u prirodi. U cilju izolacije i detekcije L. monocytogenes iz hrane koriste se tradicionalne mikrobiološke i nove molekularno-genetičke metode. Cilj ovog rada je bio povećanje osetljivosti i ponovljivosti PCR metode u detekciji L. monocytogenes u mleku. U tu svrhu, uzorci pasterizovanog mleka su kontaminirani serijskim razblaženjima sojeva L. monocytogenes 4b ATCC 119115 i Listeria innocua ATCC 33090. Dobijeni rezultati na veštački kontaminiranim uzorcima pasterizovanog mleka, ukazuju da osetljivost PCR metode zavisi od perioda inkubacije i izbora prajmera. Najbolji rezultati su dobijeni nakon 24 h inkubacije, pomoću prajmera za hlyA gen, kada je bilo moguće detektovati 1 ćeliju L. monocytogenes tj. 1 CFU/ml. AB - Listeria monocytogenes is a facultative intracellular Grampositive bacterium, ubiquitous in nature and capable of causing listeriosis in humans and animals. Conventional microbiological techniques and modern molecular approaches are currently used for the isolation and detection of L. monocytogenes in food samples. The aim of this study was to improve the sensitivity and reproducibility of PCR for the detection of Listeria spp. in milk. For that purpose milk samples were artificially inoculated with serial dilutions of L. monocytogenes 4b ATCC 19115 and L. innocua ATCC 33090. The results obtained on artificially contaminated milk samples indicated that incubation time and target genes have an influence on the sensitivity of PCR detection. The best results were obtained after 24 h of preenrichment, with primers complementary to the hlyA gene, when it was possible to detect 1 CFU/mL of Listeria spp. PB - Univerzitet u Beogradu - Fakultet veterinarske medicine, Beograd T2 - Acta Veterinaria-Beograd T1 - Poboljšana senzitivnost i reproducibilnost PCR metode za detekciju Listeria spp. i L. monocytogenes u mleku T1 - Improved sensitivity and reproducibility of the PCR method for detection of Listeria spp. and L. monocytogenes in milk EP - 245 IS - 2-3 SP - 239 VL - 61 DO - 10.2298/AVB1103239L ER -
@article{ author = "Lakićević, Brankica and Stjepanović, Aleksandra and Tolinački, Maja and Golić, Nataša and Topisirović, Ljubiša", year = "2011", abstract = "Listeria monocytogenes, prouzrokovač listerioze kod ljudi i životinja, je fakultativan intraćelijski mikroorganizam široko rasprostranjen u prirodi. U cilju izolacije i detekcije L. monocytogenes iz hrane koriste se tradicionalne mikrobiološke i nove molekularno-genetičke metode. Cilj ovog rada je bio povećanje osetljivosti i ponovljivosti PCR metode u detekciji L. monocytogenes u mleku. U tu svrhu, uzorci pasterizovanog mleka su kontaminirani serijskim razblaženjima sojeva L. monocytogenes 4b ATCC 119115 i Listeria innocua ATCC 33090. Dobijeni rezultati na veštački kontaminiranim uzorcima pasterizovanog mleka, ukazuju da osetljivost PCR metode zavisi od perioda inkubacije i izbora prajmera. Najbolji rezultati su dobijeni nakon 24 h inkubacije, pomoću prajmera za hlyA gen, kada je bilo moguće detektovati 1 ćeliju L. monocytogenes tj. 1 CFU/ml., Listeria monocytogenes is a facultative intracellular Grampositive bacterium, ubiquitous in nature and capable of causing listeriosis in humans and animals. Conventional microbiological techniques and modern molecular approaches are currently used for the isolation and detection of L. monocytogenes in food samples. The aim of this study was to improve the sensitivity and reproducibility of PCR for the detection of Listeria spp. in milk. For that purpose milk samples were artificially inoculated with serial dilutions of L. monocytogenes 4b ATCC 19115 and L. innocua ATCC 33090. The results obtained on artificially contaminated milk samples indicated that incubation time and target genes have an influence on the sensitivity of PCR detection. The best results were obtained after 24 h of preenrichment, with primers complementary to the hlyA gene, when it was possible to detect 1 CFU/mL of Listeria spp.", publisher = "Univerzitet u Beogradu - Fakultet veterinarske medicine, Beograd", journal = "Acta Veterinaria-Beograd", title = "Poboljšana senzitivnost i reproducibilnost PCR metode za detekciju Listeria spp. i L. monocytogenes u mleku, Improved sensitivity and reproducibility of the PCR method for detection of Listeria spp. and L. monocytogenes in milk", pages = "245-239", number = "2-3", volume = "61", doi = "10.2298/AVB1103239L" }
Lakićević, B., Stjepanović, A., Tolinački, M., Golić, N.,& Topisirović, L.. (2011). Poboljšana senzitivnost i reproducibilnost PCR metode za detekciju Listeria spp. i L. monocytogenes u mleku. in Acta Veterinaria-Beograd Univerzitet u Beogradu - Fakultet veterinarske medicine, Beograd., 61(2-3), 239-245. https://doi.org/10.2298/AVB1103239L
Lakićević B, Stjepanović A, Tolinački M, Golić N, Topisirović L. Poboljšana senzitivnost i reproducibilnost PCR metode za detekciju Listeria spp. i L. monocytogenes u mleku. in Acta Veterinaria-Beograd. 2011;61(2-3):239-245. doi:10.2298/AVB1103239L .
Lakićević, Brankica, Stjepanović, Aleksandra, Tolinački, Maja, Golić, Nataša, Topisirović, Ljubiša, "Poboljšana senzitivnost i reproducibilnost PCR metode za detekciju Listeria spp. i L. monocytogenes u mleku" in Acta Veterinaria-Beograd, 61, no. 2-3 (2011):239-245, https://doi.org/10.2298/AVB1103239L . .